Дженифер Энистон родилась 11 февраля 1969 года в семье актера Джона Энистона и модели Нэнси Энистон.
Дженифер Энистон, окончив школу, оказалась на перепутье. Она начала одновременно искать роли во внебродвейских постановках и ходить на курсы по психологии. Продержалась на курсах всего пять месяцев. в 1993 году Дженифер Энистон впервые снялась в кино в ужастике класса "Б" - "Лепрекон". На память о первом киноопыте у нее остался шрам на ладони.
Первая большая кинороль Дженифер Энистон в фильме "Она такая" (She's the One) показала, что она не боится быть на экране не желанной и некрасивой. Когда она пришла на пробы в сериал "Друзья" произошло нечто подобное ей предложили роль умненькой Моники, но она предпочла играть взбалмошную глупышку Рэйчел.